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小鼠膽堿乙酰化酶(CHAc)酶聯免疫試劑盒

小鼠膽堿乙酰化酶(CHAc)酶聯免疫試劑盒

簡要描述:小鼠膽堿乙酰化酶(CHAc)酶聯免疫試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中小鼠膽堿乙酰化酶(CHAc)的含量。

產品型號:

所屬分類:小鼠酶聯免疫試劑盒

更新時間:2022-08-29

詳細說明:

小鼠膽堿乙酰化酶(CHAc)酶聯免疫試劑盒

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中小鼠膽堿乙酰化酶(CHAc)的含量。

l 有效期:6個月

l 保存條件:2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷

 

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠膽堿乙酰化酶(CHAc)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠膽堿乙酰化酶(CHAc)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

小鼠膽堿乙酰化酶(CHAc)酶聯免疫試劑盒準備試劑與收集血樣

1.          收集標本:血清、血漿(EDTA)、細胞培養上清液、組織勻漿等裂解產物盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反復凍融。

2.          標準品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成16000pg/ml的溶液。設標準管8管,每管加入標本稀釋液200ul。在*管中加入16000pg/ml的標準品溶液200ul混勻后用加樣器吸出200ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出200ul棄去。第八管為空白對照。

3.          10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。

4.         洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

標本激活方法

             1.   將450ul標本稀釋液加入到一支1.5ml進口聚丙烯管中,再加10ul血清或血漿標本。

 2.   加20ul 1 N HCI,蓋緊,上下混勻。2-8℃放置60± 2分鐘。

     3.   加20ul 1 N NaOH,蓋緊,上下混勻。

     4.   即用,或放-20/-70℃保存3天。計算結果時乘以稀釋倍數50。(注意:不同的標本HSP60的水平可能有較大差異,請根據實際情況靈活掌握稀釋度)

     5.   細胞培養上清或組織勻漿10倍稀釋(410ul的標本稀釋液+50ul樣本+20ul的1N HCI+20ul的1N NaOH)。

改良雙抗體夾心法

本法是雙抗體夾心法的一種改良形式,也是用于測定抗原的,其原理可用圖來表示。本法首先是將特異性抗體a包被于固相載體,經洗滌加入含有欲測抗原之待檢樣品。經孵育洗滌后再加一次未標記的特異性抗體b,而這次加入的抗體b于*次包被于固相載體上的特異性抗體a對被測抗原來說都是特異性的,但不是用同種動物免疫制備的,否則可出現非特異性反應。經孵育洗滌后,再加酶標記抗b抗體,再經孵育洗滌后加底物顯色進行測定。這種方法與雙抗體夾心法不同之處是多加了一層抗體。因此,放大的倍數更高,故比雙抗體夾心法更加靈敏。同時避免標記特異性抗體,而另一優點是只要標記一種抗抗體,即可達到多種應用。

檢測程序

1.          加樣:每孔各加入標準品或待測樣品(已激活)100ul,將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。

2.          洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。

3.          每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。

4.          洗板:同前。

5.          每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。

6.          洗板:同前。

7.          每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗處反應15分鐘。

8.          每孔加入100ul終止液混勻。

9.          30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

結果計算與判斷

1.          所有OD值都應減除空白值后再行計算。

2.          以標準品8000、4000、2000、1000、500、250、125、0 pg/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。

3.          根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應HSP60含量,再乘上稀釋倍數即可。

試劑盒性能

             1.   靈敏度:zui小的HSP60 檢測濃度小于65pg/ml。

2.        特異性:可同時檢測重組或天然的人HSP60。不與人其它細胞因子有交叉反應。

3.        重復性:板內、板見變異系數均小于12%。

注意事項

             1.   以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。

 2.   洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高。

             3.   板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。

             4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

 5.   本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!



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