您能夠掌控好簡單而復(fù)雜的ELISA實驗嗎？當(dāng)然，對實驗的熟練度與了解度還是要靠長時間積累經(jīng)驗的。我公司技術(shù)部人員總結(jié)出ELISA實驗心得，一起來看看吧！
    
上海恒遠生物透徹分析酶聯(lián)免疫試劑盒實驗：
    ELISA測定現(xiàn)通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測定模式，測定操作非常簡單，一般涉及到標(biāo)本的收集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、大鼠ELISA試劑盒洗板、顯色、比色、結(jié)果判斷和結(jié)果報告及解釋等方面，其中任一步驟的不當(dāng)都會影響測定結(jié)果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。
    盡管ELISA測定的操作步驟非常簡單，但有可能會影響測定結(jié)果的因素卻較多，分布在測定操作的各步之中，尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測定中出現(xiàn)問題的可能原因，特對常見問題及原因歸納總結(jié)于下表。
    ELISA測定中可能會出現(xiàn)的問題及可能的原因問題可能的原因(非試劑盒本身的原因)：
 1. 弱陽性質(zhì)控樣本檢測不出 溫育的時間或溫度不夠；顯色反應(yīng)時間太短；所用配制緩沖液的蒸餾水有問題
 2. 測定的重復(fù)性差(相同樣本兩次測定結(jié)果不一致)這是典型的由測定操作引起的問題，包括加樣本及試劑量不準(zhǔn)；孔間不一致；加樣過快，孔間發(fā)生污染。
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為什么重組蛋白作為我的ELISA的對照有差異？
    首先要考慮的是重組蛋白的質(zhì)量會高出試劑盒的可測試范圍數(shù)倍，必須將重組蛋白稀釋多次才能得到試劑盒的測試范圍。一般來說是從mg/毫升稀釋到pg/毫升，在這中間光是移液管的誤差就達到了可測量的水平。
    其次要考慮的是R&D的免疫測試方法測量的蛋白水平是用一種抗體捕獲的、用第二種抗體測定的，這種測定是在試劑盒研發(fā)時與標(biāo)準(zhǔn)蛋白校正過的。這些經(jīng)過測定的早期標(biāo)準(zhǔn)蛋白成為基本校正物，后來的標(biāo)準(zhǔn)都同它校正。這樣不同生產(chǎn)批號的免疫測定試劑盒將是一致的。這些基本校正物蛋白質(zhì)量的測量方法也許與你的試劑管中蛋白質(zhì)量的測定方法有所不同。
酶聯(lián)免疫實驗前的五項準(zhǔn)備：
 1. 使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出，室溫放置至少30分鐘。
 2. 準(zhǔn)備各種實驗儀器及材料，如微量移液器，吸頭，醫(yī)用蒸餾水等
 3. 濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1:19倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液
 4. 濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1:4倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液
 5. 應(yīng)用樣品稀釋液來稀釋樣品，按照1:100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中，充分混勻待用。
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 1. 根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。
 2. 用洗板機洗板時，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙上輕輕拍干，還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。 
 3. 應(yīng)保證ELISA酶標(biāo)板清潔，整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。