亚洲精品乱码久久久久久金桔影视-www国产无套内射com-日韩国产亚洲高清在线久草-亚洲日韩看片无码超清-欧美亚洲日本国产综合在线

當前位置:網站首頁新聞中心 > 檢測細胞凋亡:DNA ladder法

檢測細胞凋亡:DNA ladder法

更新時間:2012-10-10 點擊量:3005

      發生細胞凋亡時,內源性核酸酶被激活,染色體DNA鏈在核小體之間被切割,形成180~200個堿基或其整數倍的DNA的片段,將這些DNA的片段抽提出來進行電泳,可得到DNA梯狀條帶(DNA ladder)。

一、材料與試劑

凋亡細胞

蛋白酶K(500μg/ml)

8mol/L 醋酸鉀

白細胞裂解液:pH8.0,10mmol/L Tris-HCl,10mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA,1% SDS。

氯仿

無水乙醇,70%乙醇;

2%瓊脂糖凝膠。

二、操作步驟

1. 收集凋亡細胞:取1~2×106 個細胞,離心后,立即用70%酒精(-20℃)固定2h;

2. 洗滌:取出酒精固定的細胞,1000r/min離心5min ,去掉上清液,PBS洗二次;

3. 裂解細胞:加400μl細胞裂解液,充分混勻再加蛋白酶K100μl,置65℃水浴消化2小時或過夜;

4. 蛋白處理:加75μl 8mol/L的醋酸鉀,4℃15min,再加750μl氯仿,充分混勻后,10000r/min離心10分鐘后,將上清移至一新的Eppendorf管中;

5. 沉淀DNA:加入750μl無水乙醇,上下輕柔顛倒混合,即可見乳白色沉淀,若不明顯時可置-20℃過夜,12000r/min離心10分鐘,去上清;

6. 洗滌DNA:加1ml70%乙醇,混勻,10000r/min 離心5min,去上清;

7. 溶解DNA:根據 DAN 沉淀的大小,加一定量的蒸餾水或TE,37℃溶解;

8. 測定DNA濃度;

9. 2%瓊脂糖凝膠電泳80V 2小時;

三、結果判斷

出現梯狀電泳條帶,zui小的條帶為180~200 bp,其他的條帶為其整倍數大小。壞死細胞則出現彌散的電泳條帶,無清晰可見的條帶。正常細胞DNA基因條帶因分子量大,遷移距離短,故停留在加樣孔附近。

主站蜘蛛池模板: 亚洲成av人片天堂网无码| 一本之道av不卡精品| 曰韩无码av片免费播放不卡| 伊人久久精品一区二区三区| 久久综合亚洲鲁鲁五月天| 国产女人水真多18毛片18精品| 亚洲精品国产v片在线观看| 久久九九国产精品怡红院| 18禁美女裸体爆乳无遮挡| 亚洲第一极品精品无码久久| 日本视频高清一道一区| 日本高清免费毛片久久| 欧美香蕉爽爽人人爽| 久久69国产精品久久69软件| 亚洲人成77在线播放网站| 精品人成视频免费国产| 亚洲中文字幕aⅴ天堂自拍| 亚洲伊人久久大香线蕉| 亚洲国产日韩在线人成蜜芽| 亚洲中文字幕日产无码| 国产在线精品一区二区不卡| 国产亚洲精品自在久久vr| 精品国产精品久久一区免费式| 国产午夜人做人免费视频中文| 男女性高爱潮久久| 成人亚洲a片v一区二区三区蜜臀| 国产一区二区色婬影院| 国产精品人成视频国模| 亚洲国产熟妇无码一区二区69| 上司人妻互换hd无码| 免费国产黄线在线播放| 中文字幕人妻中文| 国产熟妇另类久久久久久| 2021精品亚洲中文字幕| 人妻无码久久中文字幕专区| 亚洲aⅴ无码天堂在线观看| 五十路熟妇强烈无码 | 天天碰天天狠天天透澡| 亚洲国产精品日韩av不卡在线| 日本一卡二卡3卡四卡网站精品 | 国产日韩另类综合11页|