食物過敏原的實(shí)驗(yàn)室檢測

一、雙盲食物激發(fā)試驗(yàn)：

       雙盲食物激發(fā)試驗(yàn)為診斷食物過敏的金標(biāo)準(zhǔn)，主要用于以下情況：

（1）幾種食物同時(shí)被懷疑為過敏原且特異性IgE（sIgE）陽性，為減少患者禁食種類時(shí)可使用；

（2）高度懷疑某一過敏物，但無sIgE抗體的證據(jù)，為進(jìn)一步確定進(jìn)食該食物的安全性時(shí)使用；

（3）非IgE介導(dǎo)型食物過敏者多用該方法。患者應(yīng)先進(jìn)行排除飲食，然后施以食物刺激，在操作過程中為控制偏倚，可不讓患者知道進(jìn)食食物的種類或使用安慰劑，但對反應(yīng)較嚴(yán)重的IgE陽性的過敏原。不宜做該試驗(yàn)。由于該試驗(yàn)有一定危險(xiǎn)性，且近年來有證據(jù)表明定量IrE檢測可預(yù)測DBPCFC的試驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合臨床病史多數(shù)食物過敏可得到確診，故真正需進(jìn)行DBPCFC的患者并不多。

二、皮膚針刺試驗(yàn)（SPT）

       SPT為臨床常用的檢測過敏原特異性IrE的體內(nèi)試驗(yàn)。具體方法為用稀釋抗原液點(diǎn)刺皮膚，同時(shí)進(jìn)行陰、陽性對照，15min后觀察檢測點(diǎn)是否出現(xiàn)風(fēng)團(tuán)或潮紅反應(yīng)，如風(fēng)團(tuán)直徑超過陰性對照3mm則為陽性，表明存在與過敏原IgE結(jié)合的肥大細(xì)胞。SPTzui顯著的優(yōu)點(diǎn)是價(jià)格便宜，快速，而且可讓有疑心的患者看到結(jié)果；但許多因素如季節(jié)，測試時(shí)間，待測區(qū)域，藥物等都會(huì)影響其結(jié)果，且所用的蔬菜、水果等過敏原提取物缺乏穩(wěn)定的蛋白，故該法的重現(xiàn)性較差。同時(shí)，不同地區(qū)及醫(yī)院所檢測的過敏原種類、濃度、判別標(biāo)準(zhǔn)及質(zhì)控措施有很大差別，這使醫(yī)院間共用結(jié)果受到限制。

三、體外IgE檢測

       與體內(nèi)試驗(yàn)相比，體外檢測具有效能參數(shù)可靠，不受藥物影響，無全身反應(yīng)危險(xiǎn)等優(yōu)點(diǎn)，在下列情況下：（1）對過敏原極度敏感；（2）皮膚異常；（3）患者服用干擾皮膚反應(yīng)的藥物；（4）患者不合作或拒絕皮膚檢測；（5）患者處于嚴(yán)重過敏反應(yīng)后由于巨細(xì)胞介質(zhì)耗盡所致的不應(yīng)期。近年來，體外sIgE檢測技術(shù)有了很大的發(fā)展。

1.放射過敏原吸附試驗(yàn)（RAST）：RAST為zui早使用的過敏原檢測方法。其主要原理是將過敏原結(jié)合到固定相，加入待測血清及參考對照，血清內(nèi)存在的過敏原-slgE將吸附在固定相上，通過用放射性同位素標(biāo)記的抗IrE二抗來檢測血清中的sIgE。由于該法費(fèi)用昂貴，花費(fèi)時(shí)間長，放射性同位素易過期且污染環(huán)境，不同來源試劑盒的參比血清不同而不易相互比較，待檢血清含有相同特異性IgG時(shí)可干擾正常結(jié)果，故目前已逐漸被測定帽（CAP）過敏原檢測法所代替。

2.測定帽（CAP）過敏原檢測系統(tǒng)是目前上廣泛應(yīng)用并*較為可靠的過敏原定量體外檢測系統(tǒng)，主要原理為酶聯(lián)免疫熒光測定法（FEIA）。CAP系統(tǒng)建立于新型固體相——裝在小膠囊中的親水性載體聚合物上，由一種經(jīng)溴化氰活化的纖維素衍生物合成，與過敏原有*的結(jié)合能力。其過程為將50標(biāo)準(zhǔn)血清或患者血清加入到固有相，再將酶標(biāo)抗IgE二抗加入到固有相中，zui后測定熒光并與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較。CAP過敏原檢測法測定范圍為0.35～100KU^／L（A：allergensIgE），變異系數(shù)（CV）<10％。通常以sIgE>0.35KU^／L為臨界點(diǎn)（即陽性反應(yīng)），其陰性預(yù)報(bào)正確率達(dá)95％，敏感性也高達(dá)94％～100％，但其特異性較差，陽性預(yù)報(bào)正確率（PPV）則更低。若根據(jù)情況調(diào)整臨界點(diǎn)，則可提高其特異性和PPV，該系統(tǒng)可分析常見的6種食物過敏原：雞蛋、牛奶、花生、大豆、小麥和魚。

3.進(jìn)口試劑和方法：這些方法的儀器試劑都很昂貴。

4.生物芯片：近年來，漸趨成熟的蛋白質(zhì)芯片技術(shù)因其高通量、微型化、平行性檢測等優(yōu)點(diǎn)，正越來越多的應(yīng)用于藥物篩選、腫瘤標(biāo)志篩查J、臨床檢測等領(lǐng)域，被看作是zui有前景的診斷工具。盡管近年來蛋白芯片檢測過敏原有了很大發(fā)展，但有幾個(gè)問題仍需解決：（1）玻璃基質(zhì)本身的缺陷、芯片表面微塵的聚集及去濕化使蛋白芯片極易產(chǎn)生人為信號，而這些干擾信號是操作者不能簡單識(shí)別的，因此，必須建立嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)以評估結(jié)果；（2）蛋白芯片點(diǎn)樣不準(zhǔn)確，批間差異較大，這還需通過點(diǎn)樣技術(shù)的提高來克服。

四、生物共振技術(shù)

       目前，生物共振技術(shù)在食物過敏原檢測中的應(yīng)用受到越來越廣泛的關(guān)注。過敏是一種生物物理信息現(xiàn)象，該現(xiàn)象在人體內(nèi)產(chǎn)生需要過敏印痕的出現(xiàn)，這種過敏印痕來源于物質(zhì)與人體的多次接觸，然后逐漸產(chǎn)生基于物質(zhì)信息的生物物理印痕，一旦人體產(chǎn)生了這種印痕信息，它就可能被維持并處于休眠狀態(tài)，當(dāng)再次接觸過敏源時(shí)印痕被激活，并進(jìn)而通過生物物理脈沖誘發(fā)常見的變態(tài)反應(yīng)疾病。每種過敏印痕的信息是此種過敏原惟一的生物物理共振模式，使用共振技術(shù)可將致敏信號檢測出來。