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恒遠(yuǎn)為您簡(jiǎn)述SNP培養(yǎng)基測(cè)序的兩種方法

更新時(shí)間:2014-05-23 點(diǎn)擊量:2067

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方法一:直接測(cè)序法進(jìn)行SNP分析
在所有SNP的檢測(cè)方法中,對(duì)欲檢測(cè)片段進(jìn)行直接擴(kuò)增、測(cè)序是zui為準(zhǔn)確的方法。通常情況下,純合型SNP位點(diǎn)的測(cè)序峰為單一峰型,而雜合型SNP位點(diǎn)的測(cè)序峰為套峰,因而很容易將其區(qū)分開來。通過直接測(cè)序方法進(jìn)行SNP檢測(cè)的檢出率接近100%。
方法二:PCR-SSCP方法
單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析是一種簡(jiǎn)單、地檢測(cè)DNA或RNA序列中點(diǎn)突變的技術(shù),由于實(shí)驗(yàn)成本較低,也是一種目前較為常用的方法。

★ zui后,上海恒遠(yuǎn)高質(zhì)量培養(yǎng)基提醒您,這其中需要注意的問題:
1、PCR-SSCP只能作為一種突變檢測(cè)方法,要zui后確定突變的位置和類型,還需進(jìn)一步測(cè)序。
2、由于SSCP是依據(jù)點(diǎn)突變引起單鏈DNA分子立體構(gòu)象的改變來實(shí)現(xiàn)電泳分離的,這樣就可能會(huì)出現(xiàn)當(dāng)某些位置的點(diǎn)突變對(duì)單鏈DNA分子立體構(gòu)象的改變不起作用或作用很小時(shí),再加上其他條件的影響,使聚丙烯酰胺凝膠電泳無法分辨造成漏檢。
3、經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明小于300bp的DNA的片段中的單堿基突變,90%可被SSCP發(fā)現(xiàn)。

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