ELISA（酶聯(lián)免疫吸附劑測定）是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對于ELISA實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用。 利用ELISA進(jìn)行檢測的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等，這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。下面就常見ELISA血液樣本處理方法的整理，希望對您有所幫助。
血液采取后應(yīng)盡快進(jìn)行處理，使血清（漿）從與血細(xì)胞接觸的全血中分離出來。
血清與血漿的區(qū)別： 血清是血液凝固后缺少纖維蛋原的血漿，故血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均等同于血清。 選擇血清還是血漿樣本？ 由于血清中缺乏很多的凝血因子，但有一些凝血產(chǎn)物，如果是測凝血因子建議選擇血漿樣本；同時血漿中有纖維蛋白原，如果纖維蛋白原對待檢測指標(biāo)有影響，建議選擇血清樣本。大多數(shù)情況下二者均可以選擇。 處理方法： ♦ 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 小時或 4 度隔夜，然后 1000×g 離心 20分鐘，取上清即可。這是一個讓血液自然凝固的過程，溫度溫度越低，凝集越緩慢，可根據(jù)需要添加促凝劑。 ♦ 血漿：血漿樣本需要抗凝，一般建議用 2.0%EDTA，1%肝素，3.8%枸櫞酸鈉作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2 ~8度 1000 g 離心15 分鐘，取上清即可檢測。根據(jù)待檢測目標(biāo)物的性質(zhì)不同選取不同的抗凝劑。
處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存， 4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過 1 個月，-80度不應(yīng)超過2個月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。樣本的處理是實(shí)驗(yàn)成功的*步, ，以上就是關(guān)于常見樣本處理方法的一個簡述，供研究者參考。
恒遠(yuǎn)提醒:
如果您選擇的
抗凝劑是 | 請注意 | |
枸櫞酸鈉
（檸檬酸鈉） | Ca2+有凝血作用，枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物，從而阻止血液凝固。配成109mmol/L 的濃度和血液1:9,106mmol/L 的濃度和血液 1:4。
缺點(diǎn)：血液中溶解度低，抗凝作用較弱。
優(yōu)點(diǎn)：對凝血因子有很好的保護(hù)作用，大部分凝血試驗(yàn)都可用枸櫞酸鈉抗凝。 | |
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乙二胺四乙酸（EDTA）鹽 | 與血液中的鈣離子結(jié)合形成配位化合物，從而阻止血液凝固。15g/L EDTA和血液 1:10。
優(yōu)點(diǎn)：對紅細(xì)胞和白細(xì)胞形態(tài)影響小。
缺點(diǎn)：影響血小板的聚集。不適用于凝血實(shí)驗(yàn)和血小板功能相關(guān)實(shí)驗(yàn)的檢測。 | |
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肝素 | 通過與抗凝血酶Ⅲ結(jié)合，增強(qiáng)抗凝血酶的作用，滅活絲氨酸蛋白酶，從而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集，阻止血液凝固。肝素鈉 1g/L與血液 1:10。
優(yōu)點(diǎn)：抗凝能力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不易溶血、能耐高溫。
缺點(diǎn)：引起白細(xì)胞聚集。肝素抗凝血應(yīng)于短時間內(nèi)使用，否則放置過久血液又可凝固。 | |
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